Em 4 de fevereiro, quando uma nova cepa de coronavírus – oficialmente apelidada de SARS-CoV-2 – fervilhava em Wuhan, uma carta ao editor apareceu na revista Cell Research . Escrita por cientistas do Instituto de Virologia de Wuhan, a carta resumia as descobertas promissoras de um experimento recente. Em um tubo de ensaio, o coronavírus foi “potentemente bloqueado” por duas drogas: remdesivir e cloroquina.
A carta foi a primeira indicação de que a cloroquina, um medicamento contra a malária amplamente disponível e barato, poderia ser útil na luta contra o COVID-19, à medida que a doença causada pela nova cepa do coronavírus se tornasse conhecida. Notavelmente, um dos autores foi a “mulher morcego” da China Shi Zhengli, uma formidável virologista e especialista em coronavírus que montou um banco de dados enciclopédico de vírus transmitidos por morcegos ao longo de sua carreira de décadas. Ela também liderou a equipe que primeiro sequenciou o genoma do SARS-CoV-2 e identificou o vírus como um parente próximo de um coronavírus encontrado em morcegos ferradura de Yunnan.
O que os virologistas observaram ao microscópio foram as poderosas propriedades repelentes de vírus da cloroquina, que vieram à tona logo após a epidemia de SARS em 2003. Como a cloroquina funciona é um mistério até para os cientistas, mas o que está claro é que a droga opera em vários níveis para evitar que um vírus sequestre uma célula. Os coronavírus precisam de um ambiente ácido para entrar nas células humanas. A cloroquina, sendo alcalina, bloqueia o vírus elevando o nível de pH do corpo. A droga também previne o pico de proteínas do lado de fora do vírus e de se ligarem a um receptor celular, impedindo um processo chamado “glicosilação”. De maneira mais geral, a cloroquina estimula o sistema imunológico, o que aumenta indiretamente a capacidade do corpo de lutar contra um vírus. Significativamente, o medicamento fornece essa proteção em dois estágios – antes e depois da infecção da célula – indicando que pode ser usado como profilático.
Os virologistas de Wuhan confirmaram que os efeitos bloqueadores do vírus “antes e depois” da cloroquina eram claramente evidentes em células infectadas com novos coronavírus. Eles recomendaram testes clínicos em humanos, observando que as propriedades de reforço imunológico da droga podem “sinergicamente” aumentar o efeito antiviral em pacientes que sofrem da doença, que ainda não foi nomeada. Os autores escreveram posteriormente no Cell Discovery que a cloroquina “parece ser a droga de escolha para uso em larga escala devido à sua disponibilidade, histórico de segurança comprovada e um custo relativamente baixo”.
Muita coisa mudou desde que a carta foi publicada pela primeira vez. O surto de Wuhan é agora uma pandemia e a doença tem um nome: COVID-19. Os Estados Unidos, que tiveram mais de 4.000 mortes no final de março, são o novo epicentro.
Leia na íntegra a carta enviada ao editor do Cell Research por virologistas de Wuhan:
Remdesivir e cloroquina inibem efetivamente o novo coronavírus recém-surgido (2019-nCoV) in vitro
- Manli Wang, Ruiyuan Cao, Leike Zhang, Xinglou Yang, Jia Liu, Mingyue Xu, Zhengli Shi, Zhihong Hu, Wu Zhong & Gengfu Xiao
volume 30, Páginas 269 – 271 ( 2020 )
Caro editor,
Em dezembro de 2019, uma nova pneumonia causada por um patógeno até então desconhecido surgiu em Wuhan, uma cidade de 11 milhões de habitantes no centro da China. Os casos iniciais estavam relacionados a exposições em um mercado de frutos do mar em Wuhan. Em 27 de janeiro de 2020, as autoridades chinesas relataram 2.835 casos confirmados na China continental, incluindo 81 mortes. Além disso, 19 casos confirmados foram identificados em Hong Kong, Macau e Taiwan, e 39 casos importados foram identificados na Tailândia, Japão, Coreia do Sul, Estados Unidos, Vietnã, Cingapura, Nepal, França, Austrália e Canadá. O patógeno foi logo identificado como um novo coronavírus (2019-nCoV), que está intimamente relacionado à síndrome respiratória aguda do CoV (SARS-CoV). Atualmente, não existe um tratamento específico contra o novo vírus. Portanto, a identificação de agentes antivirais eficazes para combater a doença é urgente.
Uma abordagem eficiente para a descoberta de medicamentos é testar se os medicamentos antivirais existentes são eficazes no tratamento de infecções virais relacionadas. O 2019-nCoV pertence ao Betacoronavirus, que também contém o SARS-CoV e a síndrome respiratória do Oriente Médio CoV (MERS-CoV). Vários medicamentos, como ribavirina, interferon, lopinavir-ritonavir, corticosteroides, têm sido usados em pacientes com SARS ou MERS, embora a eficácia de alguns medicamentos permaneça controversa. Neste estudo, avaliamos a eficiência antiviral de cinco medicamentos aprovados pelo FAD, incluindo ribavirina, penciclovir, nitazoxanida, nafamostate, cloroquina e dois medicamentos antivirais de amplo espectro conhecidos, remdesivir (GS-5734) e favipiravir (T-705) contra um isolado clínico de 2019-nCoV in vitro.
Ensaios padrão foram realizados para medir os efeitos desses compostos na citotoxicidade, produção de vírus e taxas de infecção de 2019-nCoVs. Em primeiro lugar, a citotoxicidade dos compostos candidatos em células Vero E6 (ATCC-1586) foi determinada pelo ensaio CCK8. Em seguida, as células Vero E6 foram infectadas com nCoV-2019BetaCoV / Wuhan / WIV04 / 2019 a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,05 na presença de concentrações variáveis dos medicamentos de teste. DMSO foi usado nos controles. A eficácia foi avaliada pela quantificação do número de cópias virais no sobrenadante celular via RT-PCR em tempo real quantitativo (qRT-PCR) e confirmada com a visualização da expressão da nucleoproteína (NP) do vírus por microscopia de imunofluorescência 48 h após a infecção (pi) (citopático efeito não era óbvio neste momento da infecção). Entre os sete medicamentos testados, altas concentrações de três análogos de nucleosídeos, incluindo ribavirina (metade da concentração efetiva máxima (EC 50 ) = 109,50 μM, concentração metade citotóxica (CC 50 )> 400 μM, índice de seletividade (SI)> 3,65), penciclovir (EC 50 = 95,96 μM, CC 50 > 400 μM, SI> 4,17) e favipiravir (EC 50 = 61,88 μM, CC 50 > 400 μM, SI> 6,46) foram necessários para reduzir a infecção viral (Fig. 1a e Informações suplementares, Fig. S1 ). No entanto, o favipiravir demonstrou ser 100% eficaz na proteção de camundongos contra o desafio do vírus Ebola, embora seu valor de EC 50 em células Vero E6 fosse tão alto quanto 67 μM, sugerindo que mais estudos in vivo são recomendados para avaliar este nucleosídeo antiviral. Nafamostat, um inibidor potente de MERS-CoV, que impede a fusão da membrana, foi inibidor contra a infecção de 2019-nCoV (EC 50 = 22,50 μM, CC 50 > 100 μM, SI> 4,44). Nitazoxanida, um agente antiprotozoário comercial com potencial antiviral contra uma ampla gama de vírus, incluindo coronavírus humanos e animais, inibiu o 2019-nCoV em uma concentração micromolar baixa (EC 50 = 2,12 μM; CC 50 > 35,53 μM; SI> 16,76) . Recomenda-se uma avaliação in vivo adicional desta droga contra a infecção por nCoV 2019. Notavelmente, dois compostos remdesivir (EC 50 = 0,77 μM; CC 50 > 100 μM; SI> 129,87) e cloroquina (EC 50 = 1,13 μM; CC 50 > 100 μM, SI> 88,50) bloquearam potentemente a infecção por vírus em concentração micromolar baixa e mostrou alto SI (Fig. 1a, b ).
Remdesivir foi recentemente reconhecido como um medicamento antiviral promissor contra uma ampla gama de vírus de RNA (incluindo SARS / MERS-CoV ) em modelos de células em cultura, camundongos e primatas não humanos (NHP). Atualmente está em desenvolvimento clínico para o tratamento da infecção pelo vírus Ebola. Remdesivir é um análogo da adenosina, que se incorpora às cadeias de RNA virais nascentes e resulta em terminação prematura. 7 Nosso ensaio de tempo de adição mostrou que o remdesivir funcionou em um estágio pós-entrada do vírus (Fig. 1c, d), que está de acordo com seu mecanismo antiviral putativo como um análogo de nucleotídeo. Warren et al. mostraram que, no modelo NHP, a administração intravenosa de uma dose de 10 mg / kg de remdesivir resultou em níveis concomitantes persistentes de sua forma ativa no sangue (10 μM) e conferiu 100% de proteção contra a infecção pelo vírus Ebola. 7 Nossos dados mostraram que o valor de EC 90 de remdesivir contra 2019-nCoV em células Vero E6 foi de 1,76 μM, sugerindo que sua concentração de trabalho provavelmente será alcançada no NHP. Nossos dados preliminares (informações suplementares, Fig. S2 ) mostraram que o remdesivir também inibiu a infecção do vírus de maneira eficiente em uma linha de células humanas (células Huh-7 de câncer de fígado humano), que é sensível a 2019-nCoV.
A cloroquina, uma droga antimalárica e de doenças autoimunes amplamente utilizada, foi recentemente relatada como uma droga antiviral de amplo espectro em potencial. A cloroquina é conhecida por bloquear a infecção pelo vírus, aumentando o pH endossômico necessário para a fusão vírus / célula, além de interferir na glicosilação dos receptores celulares do SARS-CoV. Nosso ensaio de tempo de adição demonstrou que a cloroquina funcionou nos estágios de entrada e pós-entrada da infecção por nCoV 2019 em células Vero E6 (Fig. 1c, d) Além de sua atividade antiviral, a cloroquina tem uma atividade imunomoduladora, que pode potencializar sinergicamente seu efeito antiviral in vivo. A cloroquina é amplamente distribuída em todo o corpo, incluindo os pulmões, após administração oral. O valor EC 90 da cloroquina contra 2019-nCoV em células Vero E6 foi de 6,90 μM, o que pode ser clinicamente alcançado, conforme demonstrado no plasma de pacientes com artrite reumatóide que receberam administração de 500 mg. A cloroquina é um medicamento barato e seguro, usado há mais de 70 anos e, portanto, tem aplicação clínica potencial contra o nCoV 2019.
Nossos achados revelam que remdesivir e cloroquina são altamente eficazes no controle da infecção por nCoV 2019 in vitro. Uma vez que estes compostos foram usados em pacientes humanos com histórico de segurança e mostraram ser eficazes contra várias doenças, sugerimos que eles deveriam ser avaliados em pacientes humanos que sofrem da nova doença coronavírus.
Link original da cartas: https://www.nature.com/articles/s41422-020-0282-0
